Vắc xin mRNA là sự đưa mRNA mã hóa một kháng nguyên đặc hiệu bệnh vào cơ thể để tạo ra một kháng nguyên bằng cách sử dụng cơ chế tổng hợp protein của tế bào chủ, do đó kích hoạt phản ứng miễn dịch. Các trình tự mRNA của các kháng nguyên cụ thể thường có thể được xây dựng tùy theo các bệnh khác nhau và được vận chuyển đến các tế bào được bao bọc bởi các hạt lipidnanocarrier mới, và sau đó ribosome của người được sử dụng để dịch chuỗi RNA của chúng để tạo ra protein kháng nguyên của bệnh, được tự miễn dịch tạo ra và nhận biết. hệ thống để tạo ra một phản ứng miễn dịch, do đó đạt được khả năng ngăn ngừa bệnh tật khi đối mặt với dịch bệnh newcoronavirus đang tiếp diễn, hoạt động như sau.
Bạn đã nghĩ về những loại vắc xin khác sử dụng mrna chưa? Với dịch COVID-19 trên toàn cầu, các quốc gia đang dốc toàn lực để nghiên cứu vắc xin để ngăn chặn dịch COVID-19. vắc xin mRNA đã đóng vai trò hàng đầu như một loại vắc xin mới khi xảy ra dịch bệnh COVID-19hits. Các nhà khoa học nghiên cứu những loại vắc xin khác sử dụng mrna. Với sự phát triển của công nghệ, công nghệ mRNA cũng đóng vai trò điều trị rất tốt trong lĩnh vực điều trị khối u trong những năm gần đây. Giải quyết các khối u rắn là một định hướng quan trọng cho sự phát triển trong tương lai của liệu pháp tế bào CAR-T, và công nghệ mRNA là một trong những trợ thủ đắc lực.
Bài báo này cung cấp một số giải pháp của công nghệ đồng nhất trong phát triển vắc xin mRNA, bao gồm đo dư lượng dsRNA, đo dư lượng DNA và đo lường kháng thể trung hòa để xác định hiệu quả.
Phát hiện dư lượng dsRNA
Bộ dụng cụ này dựa trên công nghệ HTRF (huỳnh quang phân giải theo thời gian đồng nhất) để định lượng đơn giản và nhanh chóng RNA sợi đôi của virus (dsRNA) trong dịch phân ly tế bào và cung cấp PCR đơn giản để định lượng (qPCR).
Nguyên tắc phát hiện dsRNA của HTRF
DsRNA được phát hiện bằng phương pháp sandwich sử dụng kháng thể kháng dsRNA đánh dấu Eu (người cho năng lượng huỳnh quang) và kháng thể kháng dsRNA đánh dấu d2 (người nhận). khi nguồn năng lượng huỳnh quang và bộ tiếp nhận năng lượng huỳnh quang ở gần nhau do dsRNA, nhà tài trợ sẽ bị kích thích với một nguồn sáng (laze hoặc đèn flash), kích hoạt truyền năng lượng phát huỳnh quang (FRET), từ đó phát ra tín hiệu huỳnh quang ở bước sóng cụ thể ( 665 nm). Cường độ tín hiệu tỷ lệ với nồng độ của dsRNA.
Ưu điểm của công nghệ HTRF
①Hoạt động đơn giản: đổ tấm rỗng, không cần rửa và tráng tấm.
② Lưu mẫu: chỉ cần 10 μl.
③Độ nhạy cao và nền thực nghiệm thấp.
④ Thông lượng cao: phù hợp với các tấm 96/384/1536well.
Quy trình hoạt động
Phương pháp hai bước: đầu tiên thêm 10μl mẫu vào đĩa trống, sau đó thêm 5μl của mỗi thuốc thử phát hiện, ủ qua đêm để đọc đĩa bằng dấu enzym.
B. Đo lường kháng thể trung hòa để xác định hiệu quả của thuốc
1. Thử nghiệm phát quang
Luciferase của đom đóm (Luciferase) có thể xúc tác phản ứng của luciferin và ATP để tạo ra luciferin-AMP (chất trung gian) và pyrophosphat (PPi) khi có mặt các ion magiê. Quá trình oxy hóa chất trung gian sau đó được xúc tác để tạo ra AMP, CO2 và trạng thái kích thích của luciferin bị oxy hóa. Trạng thái kích thích của chất huỳnh quang oxy hóa phát sáng khi nó trở về trạng thái cơ bản. Phản ứng phát quang củaLuciferase không cần thêm ánh sáng kích thích, miễn là chất nền Luciferasea và tiếp xúc với nhau để tạo ra huỳnh quang, các photon phát ra có thể được đo bằng các phần tử nhạy sáng, tránh hiện tượng nhiễu huỳnh quang nền do kích thích của vật liệu nền.
Khi gen báo cáo được nhúng vào virus, tín hiệu phát quang có thể được phát hiện sau khi virus lây nhiễm vào tế bào ký chủ. Việc bổ sung các kháng thể trung hòa đối với vi rút có thể ngăn chặn vi rút xâm nhập vào tế bào chủ, và cường độ phát quang sẽ giảm để xác định hiệu quả của các kháng thể trung hòa.
Ưu điểm của sản phẩm phát quang PerkinElmer
① Hoạt động đơn giản và độ nhạy cao.
②Vận chuyển ở nhiệt độ phòng 2-8 ° Bảo quản nến ở 4 ° C.
③Không chứa DTT.
Quy trình hoạt động
Thêm đệm đông khô vào chất nền đông khô và trộn kỹ trong 5 phút, thêm một lượng bằng nhau vào tế bào và ủ trong 10-20 phút để đọc đĩa. Kết quả độ nhạy và thời gian bán hủy được trình bày dưới đây.
(Đây là bộ Britelite plus được sử dụng trong nghiên cứu đánh giá hoạt động kháng thể trung hòa của virus newcoronavirus do Học viện Thanh tra Trung Quốc thực hiện)
Kháng thể mới của Coronavirus SARS-CoV-2 S1 / ACE2 được tìm kiếm và phát triển trong công nghệ HTRF và AlphaLISA đã có sẵn bộ dụng cụ phát hiện sản phẩm hoàn chỉnh có liên quan.
Thử nghiệm 2 、 HTRFSARS-CoV-2S1 / ACE2
Bộ liên kết HTRF S1 / ACE2 được sử dụng để đo lường sự tương tác giữa S1 và ACE2. Sử dụng công nghệ HTRF (huỳnh quang phân giải theo thời gian đồng nhất), xét nghiệm cho phép: thông lượng cao, sàng lọc các hợp chất và chất ức chế đơn giản và nhanh chóng.
ACE2 được gắn nhãn Eu (người cho HTRF) và S1 được gắn nhãn bằng d2 (người nhận HTRF). Khi người cho và người nhận ở gần nhau do liên kết S1 và ACE2, sự kích thích của donortri sẽ kích hoạt truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET) đến người nhận, tín hiệu nào phát ra ở bước sóng 665 nm. Tín hiệu cụ thể này tỷ lệ với mức độ tương tác của S1 / ACE2. Do đó, việc ngăn chặn tương tác S1 / ACE2 bởi các hợp chất orantibodies dẫn đến giảm tín hiệu HTRF.
3. Xét nghiệm SARS-CoV-2 S1 / ACE2 AlphaLISA
Các microbead của người hiến tặng được phủ bởi protein S1 được đánh dấu sinh học streptavidincapture và cặp microbeads chấp nhận với ACE2protein của người. Các microbead của người cho và người nhận được tiếp cận bởi S1 liên kết toACE2. Dưới chiếu xạ laser 680 nm, chất cảm quang trên donormicrobeads chuyển đổi oxy từ môi trường xung quanh thành một chất nền sau khi khuếch tán vào microbeads nhận, gây ra phản ứng hóa học tạo ra tín hiệu 615 nm. Phân tích này tạo điều kiện thuận lợi cho việc sàng lọc các chất ức chế liên kết S1 / ACE2. Các công ty dược phẩm đang phát triển những loại vắc xin khác sử dụng mrna.
Ưu điểm của công nghệ AlphaLISA
① Vận hành đơn giản: không cần rửa và sơn phủ tấm.
②Độ nhạy cao và dải tuyến tính rộng: hiệu ứng khuếch đại tầng của phát quang hóa học và microbeads.
③ Nền tảng thử nghiệm thấp.
Phát hiện dư lượng DNA
LANCE là công nghệ đồng nhất TR-FRET (truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang phân giải theo thời gian). Nó có những ưu điểm của công nghệ pha đồng nhất mà không cần rửa và tách trong suốt quá trình, và được sử dụng để phân tích và định lượng các chất gây ô nhiễm DNA trong dung dịch bộ đệm và môi trường nuôi cấy tế bào. Chà, những loại vắc xin nào khác sử dụng mrna?
Kháng thể kháng DNA (người cho) được đánh dấu bằng kháng thể kháng DNA Euand (người nhận) được đánh dấu bằng ULight. Chất cho và chất nhận được đặt gần nhau, và khi được kích thích ở 320 hoặc 340nm, sự truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang được kích hoạt và chất nhận sẽ phát ra bước sóng huỳnh quang 665 nm. Cường độ tín hiệu tỷ lệ với số lượng phức hợp kháng nguyên-kháng thể được hình thành.